Première identification de Tyrophagus curvipenis (Acari : Acaridae) et détection de pathogènes dans les colonies d'Apis mellifera en République de Corée

Scientific Reports volume 13, Numéro d’article: 9469 (2023) Citer cet article

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Les acariens du genre Tyrophagus (Acari: Acaridae) sont parmi les acariens les plus largement distribués. Les espèces de ce genre causent des dommages aux produits et aux cultures entreposés et constituent une menace pour la santé humaine. Cependant, l’influence de Tyrophagus spp. en apiculture reste inconnue. En 2022, une étude axée sur l’identification des espèces de Tyrophagus dans cinq ruchers a été menée dans la province de Chungcheongnam, en République de Corée. Son objectif spécifique était d’étudier la présence d’acariens Tyrophagus en réponse à la mortalité élevée signalée des colonies d’abeilles mellifères dans cette région. L’identification morphologique et l’analyse phylogénétique à l’aide du gène mitochondrial cytochrome-c oxydase sous-unité 1 (CO1) ont confirmé pour la première fois la présence de l’espèce d’acarien Tyrophagus curvipenis dans une colonie d’abeilles mellifères en République de Corée. Deux agents pathogènes d’abeilles mellifères ont été détectés dans l’acarien, un pathogène viral (virus de l’aile déformée, DWV) et un pathogène protozoaire (Trypanosoma spp.). La présence des deux agents pathogènes des abeilles mellifères dans l’acarien suggère que cet acarien pourrait contribuer à la propagation de maladies connexes des abeilles mellifères. Cependant, l’influence directe de l’acarien T. curvipenis sur la santé des abeilles mellifères reste inconnue et devrait faire l’objet d’études plus approfondies.

Les abeilles mellifères (Apis mellifera) sont des pollinisateurs essentiels des cultures et des plantes sauvages et jouent un rôle indispensable dans la vie humaine en fournissant des produits importants tels que le miel, la gelée royale et la propolis. Cependant, la perte de colonies d’abeilles mellifères due au changement climatique et à la propagation d’agents pathogènes s’est produite dans le monde entier1,2,3. L’une des principales causes de mortalité des abeilles mellifères sont les acariens tels que Varroa spp. et Tropilaelaps spp., qui se nourrissent d’abeilles mellifères et sont des vecteurs de transmission de maladies chez les abeilles mellifères4,5,6,7. La transmission à médiation vectorielle augmente considérablement la propagation des agents pathogènes, contribuant à l’effondrement de la colonie d’abeilles infectée. L’augmentation récente du taux de perte de colonies d’abeilles mellifères est devenue une grande préoccupation pour les apiculteurs et les chercheurs; le taux de perte de colonies a atteint 36,5 % dans de nombreux pays8, et une perte d’environ 37,7 % a été signalée en 2018-2019 aux États-Unis9. En République de Corée, la valeur de la pollinisation par les abeilles mellifères a été estimée à 5,9 milliards de dollars, ce qui correspond à environ 50 % de la valeur économique de la production de fruits et légumes10; Cependant, la perte d’environ 18 % des colonies d’abeilles mellifères dans le pays a été due à des raisons inconnues11. Par conséquent, il est crucial d’identifier les facteurs qui nuisent à l’apiculture dans le pays.

Les acariens du genre Tyrophagus sont répartis dans le monde entier dans une gamme d’habitats, y compris naturels et anthropiques, ainsi que des hôtes végétaux et animaux12,13,14. Plusieurs espèces de Tyrophages endommagent les cultures économiques telles que les légumes de serre et les fleurs ornementales15,16. Tyrophagus appartient au super-ordre des Acariformes, famille des Acaridae, et il comprend environ 35 espèces répertoriées dans le monde12,17. Tyrophagus curvipenis (Acari: Acaridea) a été signalé chez divers animaux hôtes au Costa Rica et en Russie18 et chez plusieurs plantes en Nouvelle-Zélande, en France, en Australie et au Portugal12. Fain et Fauvel ont signalé pour la première fois que les acariens T. curvipenis étaient isolés à partir de structures en bois d’une serre au Portugal, et ils ont enregistré19 que les acariens habitent occasionnellement les fleurs des orchidées et peuvent se nourrir de leur pollen19. Plusieurs espèces de Tyrophagus (comme T. putrescentiae, T. curvipenis, T. tropicus, T. debrivorus, T. similis, T. longgior, T. mixtus, T. perniciosus, T. vanheurni et T. savasi) ont été associées aux abeilles20. Tyrophagus putrescentiae (Acari: Acaridae) a été détecté dans des échantillons d’abeilles mellifères mortes21, dans le corps de bourdons22 et dans des ruches d’abeilles mellifères au Brésil. Cela suggère le potentiel des acariens à nuire à la santé humaine lors de la consommation de produits provenant d’abeilles contaminées23. Aucune étude ne rapporte la présence des neuf espèces restantes de Tyrophagus chez les abeilles mellifères. Agissant comme porteurs potentiels d’agents pathogènes ou vecteurs d’infections pathogènes, ces acariens peuvent affecter indirectement les humains24,25,26; par conséquent, le rôle de T. curvipenis et d’autres espèces d’acariens infectant les abeilles mellifères nécessite des études et une évaluation plus approfondies.

L’identification des acariens Tyrophagus est traditionnellement basée sur la morphologie12,14,27. Cependant, cette méthode est laborieuse en raison de la petite taille des acariens Tyrophagus, nécessite une bonne compréhension des traits morphologiques et prend du temps. La méthode moléculaire basée sur le gène mitochondrial cytochrome-c oxydase sous-unité 1 (CO1) et l’espaceur interne transcrit 2 (ITS2) ribosomique) nucléaire a été suggérée comme outil alternatif pour l’identification des espèces d’acariens microscopiques28.

Le dépistage des facteurs responsables de la perte de colonies d’abeilles mellifères a été effectué dans les colonies mortes recueillies dans les régions où l’effondrement des colonies est élevé signalé en hiver. Ici, des acariens ont été détectés et collectés dans des colonies d’abeilles mellifères mortes en République de Corée en 2022. Les séquences CO1 et ITS2 ont été analysées pour identifier les espèces d’acariens. En outre, les agents pathogènes des abeilles mellifères transportés par l’acarien ont également été identifiés.

L’examen microscopique des échantillons d’abeilles mellifères a révélé la présence d’acariens T. curvipenis dans leur corps, avec un taux d’infestation de 100%. Les acariens isolés de la colonie d’abeilles mellifères étaient associés à différents stades de vie des échantillons d’abeilles mellifères recueillis, à savoir les stades de l’œuf, de la larve, de la nymphe et de l’adulte (Fig. 1a–d). Le genre Tyrophagus présente une caractéristique distincte chez les acariens adultes, leur idiosoma apparaissant blanchâtre à semi-transparent (Fig. 1d). L’identification de l’espèce d’acarien T. curvipenis Fain & Fauvel (Acari: Astigmata: Acaridae) était basée sur les caractéristiques femelles et mâles. Les acariens femelles étaient petits, pâles, idiosoma de 415–451 μm (n = 2) de long, 218–225 μm de large ; chélicères 82–86 μm ; bouclier prodorsal presque pentagonal, taches oculaires proéminentes, 83–84 μm de long, 86–84 μm de large ; soie supracoxale (SCX, 31–36 μm) mince, avec quatre pectinations modérées ou courtes ; L’organe de Grandjean en forme de doigt, son lobe basal avec deux dents spiniformes; les soies hystérosomiques C1, D1 et D2 relativement plus courtes que les autres; C1 (34–42 μm) un peu plus court que D2 (35–47 μm), D1 (117–109 μm) environ 3,4 × la longueur de C1 et 2,6 × la longueur de D2 ; canal spermathécal étroit, base du sac spermathécal en forme de R (Fig. 2a); plaque coxale II largement triangulaire, s’étendant distalement au-delà de l’apex de l’apodème II, avec 1/3 de marge postérieure légèrement concave ; tarse I ω1 mince, cylindrique et légèrement élargi à l’apex, tarse II ω mince, presque cylindrique ; soies ω et r du tarse IV sétiforme (Fig. supplémentaire. S1).

Différents stades de Tyrophagus curvipenis détectés chez les abeilles mellifères (Apis mellifera). L’identité des acariens acaroïdes a été déterminée en analysant les caractéristiques morphologiques à l’aide d’un microscope à contraste de phase. Différents stades de vie de l’acarien sont présentés: œuf (a), larve (b), nymphe (c) et adulte (d).

Caractérisation morphologique de Tyrophagus curvipenis. L’identification des acariens Tyrophagus était basée sur la position des soies ve, la forme des soies scx. (a) femelles, la comparaison de la taille des soies c1, d1 et d2 à la distance entre ces soies et les soies postérieures, et la forme de la spermathèque femelle, (b) Aedeagus mâle, en forme de S et deux ventouses uniformément réparties sur le tarse IV.

Le mâle était plus petit que la femelle, idiosoma 319 μm (n = 1) de long, 196 μm de large. Chélicères 71 μm; oculaires, plaques coxales I et II, et solénidies I ω1 et II ω comme chez la femelle; aedeagus courbé en forme de S; deux ventouses uniformément réparties sur tarse IV (Fig. 2b).

La famille à laquelle appartient cette espèce peut être déterminée sur la base des caractéristiques morphologiques observées au microscope. Bien que les traits morphologiques soient très utiles pour l’identification initiale, il peut être difficile de distinguer avec précision les espèces exactes. Pour confirmer l’identification, des paires d’amorces spécifiques à l’espèce ciblant le gène CO1 et les régions du gène ITS2 des acariens Tyrophagus ont été conçues. Nous avons optimisé avec succès les conditions de réaction PCR pour amplifier les gènes CO1 et ITS2. Les séquences ont ensuite été déterminées par analyse de séquences. L’amplification des régions CO1 et ITS2 à partir d’échantillons d’acariens et d’œufs adultes a produit des bandes d’une longueur prévue de 379 et 500 pb, respectivement (Fig. 3a). Les séquences des régions amplifiées étaient 100% similaires entre les échantillons d’adultes et d’œufs. La recherche des séquences de CO1 obtenues dans la base de données GenBank (blast.ncbi.nlm.nih.gov) a révélé une identité de séquence de 100% avec T. curvipenis originaire du Costa Rica (numéro d’acquisition NCBI: KY986270) et une similitude de 86,64% avec T. putrescentiae (numéro d’acquisition NCBI: MH262448). Les séquences IST2 de T. curvipenis ne sont pas disponibles dans la base de données du NCBI, et la recherche des séquences isolées des échantillons dans la base de données GenBank a révélé la plus grande similitude de 91,78% avec T. putrescentiae en Chine (numéro d’acquisition NCBI: GQ205623.1). De plus, une bande non spécifique (environ 1,7 kb de long) a été observée dans l’amplification ITS2 à partir d’un échantillon adulte (Fig. 3b). La bande inattendue a été extraite pour le séquençage. Cependant, le résultat n’a pas été identifié en raison du mauvais résultat de séquençage.

Amplification des régions CO1 et ITS2 à partir d’acariens isolés d’abeilles mellifères. a) produit PCR du CO1, b) produit PCR des STI2. Les produits de PCR ont été confirmés sur le gel d’agarose à 1%. La voie M est une échelle d’ADN de 100 pb; Les voies 1 et 2 sont des produits PCR des échantillons d’œufs et d’adultes, respectivement. La voie « - » est un contrôle négatif sans modèle d’ADN. La taille de l’amplicon de l’échantillon d’ADN est indiquée par paire de bases (pb).

L’analyse phylogénétique basée sur les séquences du gène CO1 a placé la sœur de l’acarien collecté avec l’isolat AD2025 de T. curvipenis collecté dans un nid d’oiseau au Costa Rica et les deux étaient dans le même clade que T. curvipenis isolé de plantes (pêche et chayote) en Russie et au Costa Rica (Fig. 4).

Arbre phylogénétique voisin basé sur des séquences de gènes CO1. Le nom de l’espèce, les numéros d’accession NCBI et l’origine de l’acquisition sont donnés pour chaque séquence. L’acarien identifié dans les échantillons d’abeilles mellifères dans cette étude est en gras.

La détection d’agents pathogènes à partir de 15 échantillons d’abeilles mellifères a montré que les échantillons d’abeilles étaient infectés par DWV, BQCV et Trypanosoma (tableau supplémentaire S1). Par conséquent, pour identifier la possibilité de l’infection pathogène des abeilles mellifères chez les acariens, nous avons effectué la détection d’agents pathogènes en utilisant des acides nucléiques totaux extraits des acariens. Deux agents pathogènes d’abeilles mellifères (DWV et trypanosoma) ont été détectés dans des œufs et des échantillons adultes de l’acarien. De plus, les deux agents pathogènes étaient présents dans les échantillons d’abeilles mellifères provenant des mêmes colonies où les acariens ont été recueillis. L’identité des agents pathogènes a été confirmée à l’aide de la PCR en temps réel à transcription inverse (RT-qPCR), qui a produit des bandes de 199 pb et 276 pb pour le DWV et le trypanosoma, respectivement (Fig. 5 et 6).

Détection du virus des ailes déformées (DWV) à partir d’échantillons d’abeilles mellifères et d’acariens. La détection positive du DWV a été identifiée dans les courbes d’amplification de la RT-qPCR (a). Les résultats ont été confirmés en visualisant la bande attendue (199 pb de long) sur gel d’agarose (b). Lane M est un marqueur ADN de 100 pb. Les voies 1 et 2 sont des bandes amplifiées à partir d’échantillons d’œufs et d’adultes de Tyrophagus curvipenis, respectivement. Les voies 3 et 4 indiquent les résultats d’échantillons d’abeilles mellifères prélevés dans deux colonies. La voie « − » est un contrôle négatif sans modèle d’ADN, et la voie '+' est un contrôle positif utilisant l’ADN recombinant du DWV.

Détection de Trypanosoma à partir d’échantillons d’abeilles mellifères et d’acariens. La détection positive de Trypanosoma en temps réel par PCR (a) a été confirmée avec la bande attendue (276 pb) sur le gel d’agarose d’électrophorèse (b). Les couloirs 1 et 2 indiquent les résultats de la détection à partir d’échantillons d’œufs et d’adultes de T. curvipenis, respectivement. Les voies 3 et 4 sont le résultat de la détection de Trypanosoma à partir d’échantillons d’abeilles mellifères prélevés dans deux colonies différentes. La ligne '−' est un contrôle négatif sans modèle d’ADN, et la ligne '+' est un contrôle positif utilisant l’ADN recombinant de Trypanosoma.

Dans cette étude, les acariens Tyrophagus ont été détectés et identifiés dans les colonies de cinq ruchers à Gongju, province de Chungcheongnam, République de Corée. Il s’agit du premier signalement de T. curvipenis dans les colonies d’A. mellifera du pays. L’identification morphologique et l’identification génétique à l’aide du gène CO1 ont révélé que l’acarien appartient à l’espèce T. curvipenis, et l’analyse phylogénétique de la séquence obtenue a indiqué une relation étroite entre T. curvipenis de la République de Corée et l’isolat d’un nid d’oiseau au Costa Rica (Fig. 4). En outre, la phylogénie des espèces de Tyrophagus basée sur la similitude nucléotidique dans la région du gène CO1 a montré que le T. curvipenis détecté chez les abeilles mellifères dans cette étude était dans le même groupe que celui identifié dans des plantes telles que la pêche et la chayote de Russie et du Costa Rica. Le résultat suggère que la source de T. curvipenis identifiée dans cette étude pourrait être une fleur visitée par l’abeille pour la collecte de pollen et de nectar. Quatre des 35 espèces identifiées dans le genre Tyrophagus ont été signalées à ce jour en République de Corée : T. putrescentiae, T. similis, T. neiswanderi et T. longior29,30,31. Tyrophagus curvipenis rapporté ici est donc une espèce nouvellement enregistrée en République de Corée. Comme d’autres espèces, T. curvipenis a été trouvé dans des ruches d’abeilles mellifères en Nouvelle-Zélande32. Il a été signalé que T. putrescentiae en Corée (Wanju-gun, Jeonnam) habite les ruches et se nourrit de débris et de pollen33. Cependant, la relation entre la santé des abeilles mellifères et la présence de l’acarien T. curvipenis dans la ruche reste inconnue.

La méthode moléculaire a été utilisée avec succès pour identifier les espèces de Tyrophagus. Le résultat de la méthode moléculaire basée sur la séquence du gène CO1 était cohérent avec l’identification basée sur les caractéristiques morphologiques. Cependant, en raison de la disponibilité limitée des séquences de Tyrophagus dans la base de données du NCBI, l’identification de l’espèce de l’acarien Tyrophagus n’a pas pu être confirmée à l’aide de la région IST2. De plus, la paire d’amorces IST2 a amplifié une bande non spécifique en utilisant l’ADN total extrait des acariens adultes (Fig. 3b). Le gène CO1, en raison d’une plus grande base de données de séquences déposées, est potentiellement plus bénéfique pour l’identification des espèces d’acariens Tyrophagus.

L’infestation des abeilles mellifères par des acariens hémolymphes tels que Varroa et Tropilaelaps a augmenté la perte de colonies au cours de la saison hivernale et la transmission de maladies des abeilles mellifères4,6,7,34,35,36. Les agents pathogènes viraux, bactériens et fongiques des abeilles mellifères hébergés et transmis par les acariens Varroa et Tropilaelaps ont été démontrés36,37. L’acarien T. curvipenis détecté dans cette étude était positif pour un agent pathogène viral de l’abeille mellifère (DWV) et un agent pathogène protozoaire (trypanosoma). L’infection par ces agents pathogènes affaiblit la colonie et augmente la mortalité hivernale des abeilles mellifères38,39,40. De plus, ces agents pathogènes ont été détectés dans les échantillons d’abeilles mellifères où les acariens ont été collectés, ce qui suggère une forte possibilité de transmission de tels agents pathogènes par les acariens dans les ruches. De plus, les acariens Tyrophagus, communément appelés acariens de stockage, se nourrissent de moisissures présentes dans les aliments41,42. Cependant, les sources de nourriture de T. curvipenis dans les ruches d’abeilles mellifères restent inconnues. Par conséquent, comprendre l’influence de l’acarien T. curvipenis sur les abeilles mellifères aiderait à développer des méthodes appropriées pour la prévention et le contrôle des acariens. De plus, il est nécessaire de minimiser les effets potentiels des acariens sur les humains qui consomment les produits apicoles recueillis dans les colonies infestées, car certains acariens Tyrophagus ont été identifiés comme des allergènes chez les animaux et les humains43,44. Avec un taux d’infestation observé de 100% et le potentiel de servir de vecteurs de maladies intermédiaires au sein des colonies d’abeilles mellifères dans les cinq ruchers étudiés, les acariens Tyrophagus jouent potentiellement un rôle important dans les pertes de colonies observées. Les résultats de cette étude ont le potentiel de contribuer à l’élaboration de stratégies de gestion ciblées visant à minimiser l’impact de l’infestation par les acariens Tyrophagus sur la santé des abeilles mellifères et à améliorer les taux de survie globaux des colonies. En comprenant l’importance des acariens du Tyrophage en tant que contributeurs potentiels au déclin des colonies, des mesures proactives peuvent être mises en œuvre pour atténuer leurs effets négatifs et préserver le bien-être des populations d’abeilles mellifères.

Il s’agit de la première mention d’acariens T. curvipenis dans les colonies d’abeilles mellifères en République de Corée, et cette étude a démontré la présence d’agents pathogènes d’abeilles mellifères (DWV et Trypanosoma) chez les acariens. Le résultat suggère que l’acarien pourrait jouer un rôle important dans la propagation des agents pathogènes des abeilles mellifères. Cependant, la question de savoir si l’acarien T. curvipenis a contribué à la mort des colonies d’abeilles mellifères n’a pas été confirmée dans cette étude; Par conséquent, une étude plus approfondie est nécessaire pour comprendre l’influence de cet ennemi et vecteur biologique des agents pathogènes des abeilles mellifères en apiculture, et pour révéler le risque potentiel d’acariens pour les humains consommant les produits recueillis dans les colonies d’abeilles mellifères infestées.

Des échantillons d’abeilles mellifères ont été prélevés dans des colonies mortes dans des ruchers de Gongju-si, dans la province de Chungcheongnam, en République de Corée, en novembre 2022. Au total, 45 échantillons d’abeilles mellifères ont été prélevés dans 15 colonies de cinq ruchers différents pour l’examen des acariens. La présence d’acariens a été confirmée au microscope à dissection. Les acariens ont été collectés à la surface du corps et des poils des abeilles mellifères. Les acariens ont été montés sur des diapositives avec le médium de Hoyer. Les spécimens ont été identifiés et mesurés selon Fan et Zhang12. Toutes les mesures utilisées ici sont en micromètres. Après l’identification de l’espèce, les acariens ont été utilisés pour l’analyse génétique et la détection d’agents pathogènes.

Des échantillons d’abeilles mellifères et des acariens collectés ont été lavés trois fois avec de l’eau distillée UltraPure™ (Invitrogen, États-Unis) et utilisés pour l’extraction totale des acides nucléiques. Le kit de purification virale des acides nucléiques totaux Maxwell RSC (Promega, États-Unis) a été utilisé pour l’extraction des acides nucléiques conformément aux instructions du fabricant. Les acides nucléiques extraits ont été utilisés pour la détection des agents pathogènes des abeilles mellifères. L’extraction de l’ADN génomique des acariens (ADNg) a été effectuée à l’aide d’un mini kit d’ADN QIAamp (Qiagen, Royaume-Uni) conformément aux instructions du fabricant, avec quelques modifications45. Dix acariens adultes ou quatre œufs d’acariens prélevés dans chaque colonie d’abeilles mellifères ont été regroupés et placés dans un tube de 1,5 mL contenant 200 μL de tampon ATL et 2,381 mm de billes d’acier (Hanam, ROK). Après homogénéisation à 5000 rpm pendant 15 s, 20 μL de protéinase K (50 μg/mL) ont été ajoutés et le mélange a été incubé à 56 °C pendant 1 h. Exactement 200 μL de tampon de lyse ont été ajoutés à la solution, et la solution a été incubée pendant 10 min à 70 °C. Ensuite, 200 μL d’éthanol à 98% ont été ajoutés et le mélange a été mélangé par vortex. La solution a été transférée dans la mini-colonne de spin AIAamp et centrifugée à 12 000×g pendant 1 min. Après avoir lavé la colonne de spin deux fois avec le tampon de lavage, l’ADN génomique des acariens a été élué dans un nouveau tube à l’aide du tampon d’élution et centrifugé à 12 000×g pendant 2 min. L’ADN isolé a été utilisé pour l’amplification par PCR des régions CO1 et ITS2.

Les échantillons d’acariens et d’abeilles mellifères de chaque colonie ont été analysés pour détecter la présence d’agents pathogènes d’abeilles mellifères en utilisant l’acide nucléique total d’échantillons d’abeilles mellifères et d’acariens. Les agents pathogènes des abeilles mellifères ciblés pour la détection comprenaient la loque américaine (AFB), la loque européenne (EFB), Ascosphaera apis (ASCO), Aspergillus flavus (ASP), Nosema, Acarapis woodi (ACAR), Apocephalus borealis (PHORID), le virus de la saccoude (SBV), le DWV, le virus des cellules de la reine noire (BQCV), le virus de la paralysie chronique des abeilles (CBPV), le virus de l’abeille du Cachemire (KBV), le virus de la paralysie aiguë des abeilles (ABPV), le virus israélien de la paralysie aiguë (IAPV), le virus filamenteux Apis mellifera (AmFV), clades du virus du lac Sinaï (LSV1, LSV2, LSV3, LSV4), Trypanosoma, Varroa destructor virus-1 (VDV-1; DWV-B) et le virus recombinant de l’aile déformée-Varroa destructor virus-1 (DWV-VDV-1). La détection d’agents pathogènes a été effectuée dans des échantillons d’abeilles mellifères à l’aide de kits RT-qPCR (Kit RT-PCR en temps réel LiliF ABPV/KBV/IAPV/CBPV, LifiF SBV/KSBV/DWV/BQCV Real-time RT-PCR Kit [iNtRON Biotechnology, Inc., ROK], Pobgen bee pathogen detection Kit [Postbio, ROK] et iTaq Universal SYBR green one-step Kit [Bio-Rad, USA]). Les amorces utilisées pour la détection des agents pathogènes des abeilles mellifères sont présentées dans les tableaux supplémentaires S2 et S3. Les agents pathogènes détectés dans les échantillons d’abeilles mellifères ont été ciblés pour être détectés dans des échantillons d’acariens à l’aide des kits PCR.

Les régions CO1 et ITS2 des acariens ont été amplifiées à l’aide d’ensembles d’amorces universels CO1-forward (5ʹ-GTTTTGGGATATCTCTCATAC-3ʹ) et CO1-reverse (5ʹ-GAGCAACAACATAATAAGTATC-3ʹ)46; et ITS2-avant (5ʹ-CGACTTTCGAACGCATATTGC-3ʹ) et ITS2-inverse (5ʹ-GCTTAAATTCAGGGTAATCTCG-3ʹ)47. Chaque mélange réactionnel (20 μL) était composé de 20 ng de gabarit d’ADNg, de 1 μL de chaque amorce (10 pmol), d’AccuPower® PCR preMix et Master Mix (Bioneer, Corée) et de ddH2O (pour obtenir jusqu’à 20 μL). Le protocole du thermocycleur PCR a été optimisé comme suit : 94 °C (5 min) ; 5 cycles de 94 °C (20 s), 52 °C (30 s) et 68 °C (30 s); suivi de 5 cycles de 94 °C (20 s), 50 °C (30 s) et 68 °C (30 s); 30 cycles de 94 °C (20 s), 48 °C (30 s), 68 °C (30 s); et les 30 derniers cycles de 94 °C (20 s), 46 °C (30 s), 68 °C (30 s); et l’étape finale d’extension à 68 °C (5 min). Après confirmation des bandes de CO1 (379 pb) et ITS2 (500 pb) par électrophorèse sur gel d’agarose, les bandes ont été extraites et purifiées à l’aide d’un kit d’extraction de gel QIAquick (Qiagen). Les produits PCR purifiés ont été séquencés par Cosmogenetech Co, Ltd. (ROK).

Les séquences nucléotidiques identifiées à partir de différents échantillons d’adultes et d’œufs ont été soumises à une recherche BLASTn dans la base de données nucléotidiques du NCBI. Les séquences nucléotidiques ont été alignées à l’aide des logiciels BioEdit et Cluster W48,49. L’arbre phylogénétique basé sur la séquence CO1 a été créé à l’aide de la méthode de jointure de voisins avec 1000 réplications bootstrap50 dans le logiciel MEGA751.

Toutes les données générées ou analysées au cours de la présente étude sont disponibles dans le référentiel du National Center for Biotechnology Information (NCBI), numéro d’acquisition : OQ121480 (ITS2) et OQ121363 (CO1).

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Nous tenons à remercier les apiculteurs d’avoir fourni les acariens échantillons. Nous remercions tout particulièrement le Dr Heung Shik Lee, le Dr Nyen Gi Jung et le Dr Ju Haeng Hur pour leurs précieux commentaires sur ce travail. Nous remercions également Se Jeong Ahn, du Laboratoire des maladies parasitaires et des abeilles mellifères, pour son aide dans la collecte des acariens et le travail microscopique. Ce travail a été soutenu par l’Agence de quarantaine animale et végétale de la République de Corée (numéro de subvention M-1543081-2022-24-02).

Ces auteurs ont contribué à parts égales : Thi-Thu Nguyen, Mi-Sun Yoo et A-Tai Truong.

Laboratoire des maladies parasitaires et des maladies des abeilles mellifères, Division des maladies bactériennes, Département de la recherche sur la santé animale et végétale, Agence de quarantaine animale et végétale, Center for Honey Bee Disease Control, 39660, Gimcheon, République de Corée

Thi-Thu Nguyen, Mi-sun Yoo, A-tai Truong, So Youn Youn, Se-Ji Lee, Dong-Ho Kim, Soon-seek Yoon & Yun Sang Cho

Phytovirus Control Division, Department of Plant Quarantine, Animal and Plant Quarantine Agency, Gimcheon, 39660, République de Corée

Le jeune Ho Lee

Faculté de biotechnologie, Thai Nguyen University of Sciences, Thai Nguyen, Vietnam

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Correspondance avec Yun Sang Cho.

Les auteurs ne déclarent aucun intérêt concurrent.

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Réimpressions et autorisations

Nguyen, TT., Yoo, MS., Truong, AT. et al. Première identification de Tyrophagus curvipenis (Acari: Acaridae) et détection d’agents pathogènes dans les colonies d’Apis mellifera en République de Corée. Sci Rep 13, 9469 (2023). https://doi.org/10.1038/s41598-023-36695-z

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Reçu le : 09 mars 2023

Acceptée: 08 juin 2023

Publication : 10 juin 2023

DEUX : https://doi.org/10.1038/s41598-023-36695-z

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